GIST-T1复苏培养细胞株代次低
gist-t1复苏培养细胞株代次低 "
实验细胞培养基常见问题总结：
培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是最基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。别小看细胞培养，这里可蕴含着大大的学问。有时候细胞状态不好，接下来的一系列实验根本就没法做。影响细胞培养的因素很多，那就先从培养基开始说起。
培养基常见问题：
1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？atcc、dsmz、ecacc、riken、promocell、sciencell、ecacc、jcrb、kclb、asterand、iclc以及少数国内外著名大学细胞库收集了绝大多数细胞的详细资料。细胞数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关文献等资料。
2.液体培养基可以放-20℃保存吗？不可以！因为在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致培养基渗透压降低，培养细胞时，细胞容易破裂而死亡。
3.自己新配制的液体培养基能保存多久？我们建议将新配制的培养基放置于4℃，避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。
4.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
5.培养基中是否须添加抗生素？除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。为防止细菌、真菌污染，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100u/ml，链霉素为100ug/ml。
6.为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且ph值越来越偏碱性？培养基保存于4℃冰箱中， 培养基内之co2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之co2，以调整ph值。
7.培养液ph是怎样影响细胞生长的？由于大多数细胞适宜ph值为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对ph值要求也不完全相同，原代细胞培养一般对ph值变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此，配制培养用液时可把液体的ph值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时，ph值会向上浮动0.2左右。
8.培养液渗透压是怎样影响细胞生长的？当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情况下，水分通过渗透流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩，这种情况会使dna和蛋白遭到破坏，细胞周期停滞以及最终使细胞死亡；反之，低渗透压使水分流入细胞内，使细胞肿胀破裂。
9.为什么液体培养基1640有时候颜色发黄，是ph值不对吗？不是。因为配方原因，1640为碱酚红型，其中酚红的浓度只有dmem的四分之一，所以是因为酚红浓度低，而非ph值低。
10.为什么有客户要求培养基中不含酚红？研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。" "
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：
在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！
出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：
1.解冻过程中细胞裂解
推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升。
2.解冻过程中的问题
推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的首选方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养。
3.对冷冻液过敏
推荐的解决方案：a.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。b.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的最佳条件在对数期。
4.被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄
推荐的解决方案：解冻最近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
出现大量细胞碎片的可能原因及推荐解决方案如下：
1.冷冻时细胞密度过低：推荐的解决方案：缩短解冻过程中的时间。将细胞取出后，立即将冻存管浸入在37℃的水浴中，并震荡至全部融化，然后迅速地转移到预热的培养基中。
2.不适当的冷冻过程：推荐的解决方案：解冻不同冷冻室总的试管。确保在冻存过程中采用的适当的技术，并确保使用了适量和适合的冷冻液。
出现生长缓慢的可能原因及推荐解决方案如下：
1.培养瓶的大小：一般解决方案是一些细胞在培养基中倾向于维持一定的密度。将培养物转移到较小的培养瓶中，使细胞密度上升；如，根据培养基的体积，从t75培养瓶转移到2或3个t25培养瓶中。
2.细胞密度过低：通常解决方案是提高未来冷冻物种细胞的冻存密度，或使用较小的培养容器，或解冻多个试管来进行培养。" "
常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、 细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
3、对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。
4、对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时（即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白），此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。
复苏细胞注意事项：
1收到细胞后当天换液，全部更换成客户自己的新鲜培养基，放进培养箱，第二天再消化。
2边观察边消化，根据细胞的形态，终止消化时间，采取以半分钟间隔吹打细胞边缘，如可吹打下来，即终止消化。客户摸索比较好的消化时间。
3随细胞有一份细胞操作说明书，请客户仔细查看。
4记得加1%双抗，降低被污染的概率。另外尽早冻存留种，以备后用。
5售后时间为一周，仅限于细胞本身的质量问题，而因乙方自己不当操作（不规范操作，消化过度，不加双抗导致的污染等）导致的细胞问题不在售后范畴。
6收到细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请您务必重视。
7刚收到细胞时，胎牛血清可以用15%培养两三天，利于细胞尽快恢复状态，细胞状态稳定后，再调回10%即可。
（其中1,2条针对于贴壁细胞，悬浮细胞详情请见细胞操作说明书）" "
公司提供部分atcc细胞有(限于页面篇幅，公司全部细胞并未展示，如有具体所需细胞，请咨询我们哦┈技┈术(订购)┈热┈线：0┈2┈1┈5┈4┈3┈8┈5┈3┈1┈3(1┈5┈8┈0┈0┈5┈7┈6┈8┈6┈7┈微┈信┈同┈号)┈联┈系┈q┈q：3┈3┈0┈6┈0┈8┈4┈3┈5┈0)；ccl-2|hela细胞；htb-35|siha细胞；crl-1550|caski细胞；crl-1671|rl95-2细胞；htb-31|c-33a细胞；crl-2505|22rv1细胞；htb-144|jar细胞；htb-36|jeg-3细胞；ccl-98|bewo细胞；crl-11609|rwpe1细胞；crl-1635|hs68细胞；htb-133|t-47d细胞；crl-2327|hcc1428细胞；htb-125|hs 578bst细胞；htb-24|mda-mb-157细胞；crl-1735|lec1细胞；crl-11731|tov-112d细胞；htb-32|ht-3细胞；ccl-243|k562细胞；ccl-213|daudi细胞；ccl-246|kg-1细胞；tib-161|hut 78细胞；crl-2570|a3细胞；tib-202|thp-1细胞；crl-9792|dami细胞；crl-2021|meg-01细胞；crl-2099|ku812细胞；crl-2724|kasumi-1细胞；crl-2003|tf-1细胞；hb-82|bb7.2细胞；crl-11386|tall-104细胞；tib-162|hut-102细胞；ccl-86|raji细胞；crl-1648|ca46细胞；crl-1596|ramos(ra.1)细胞；crl-1432|namalwa细胞；crl-1593.2|u937细胞；crl-1582|molt-4细胞；crl-1993|hmy2.cir细胞；ccl-119|ccrf-cem细胞；crl-8001|okt3细胞；ccl-137|hel299细胞；crl-2407|nk-92细胞；crl-2408|nk-92mi细胞；htb-104|cates-1b细胞；" "
北京朝阳|海淀|通州|房山|丰台|昌平|大兴|顺义|西城|延庆县|石景山|宣武|怀柔|崇文|密云县|东城|平谷|门头沟|广东东莞|广州|中山|深圳|惠州|江门|珠海|汕头|佛山|湛江|河源|肇庆|清远|潮州|韶关|揭阳|阳江|梅州|云浮|茂名|汕尾|山东济南|青岛|临沂|济宁|菏泽|烟台|淄博|泰安|潍坊|日照|威海|滨州|东营|聊城|德州|莱芜|枣庄|江苏苏州|徐州|盐城|无锡|南京|南通|连云港|常州|镇江|扬州|淮安|泰州|宿迁|河南郑州|南阳|新乡|安阳|洛阳|信阳|平顶山|周口|商丘|开封|焦作|驻马店|濮阳|三门峡|漯河|许昌|鹤壁|济源|上海松江|宝山|金山|嘉定|南汇|青浦|浦东新区|奉贤|徐汇|静安|闵行|黄浦|杨浦|虹口|普陀|闸北|长宁|崇明县|卢湾|河北石家庄|唐山|保定|邯郸|邢台|河北|沧州|秦皇岛|张家口|衡水|廊坊|承德|浙江温州|宁波|杭州|台州|嘉兴|金华|湖州|绍兴|舟山|丽水|衢州|陕西西安|咸阳|宝鸡|汉中|渭南|安康|榆林|商洛|延安|铜川|湖南长沙|邵阳|常德|衡阳|株洲|湘潭|永州|岳阳|怀化|郴州|娄底|益阳|张家界|湘西州|重庆江北|渝北|沙坪坝|九龙坡|万州|永川|南岸|酉阳县|北碚|涪陵|秀山县|巴南|渝中|石柱县|忠县|合川|大渡口|开县|长寿|荣昌县|云阳县|梁平县|潼南县|江津|彭水县|綦江县|璧山县|黔江|大足县|巫山县|巫溪县|垫江县|丰都县|武隆县|万盛|铜梁县|南川|奉节县|双桥|城口县|福建漳州|厦门|泉州|福州|莆田|宁德|三明|南平|龙岩|天津和平|北辰|河北|河西|西青|津南|东丽|武清|宝坻|红桥|大港|汉沽|静海县|塘沽|宁河县|蓟县|南开|河东|云南昆明|红河|大理|文山|德宏|曲靖|昭通|楚雄|保山|玉溪|丽江|临沧|思茅|西双版纳|怒江|迪庆|四川成都|绵阳|广元|达州|南充|德阳|广安|阿坝|巴中|遂宁|内江|凉山|攀枝花|乐山|自贡|泸州|雅安|宜宾|资阳|眉山|甘孜|广西贵港|玉林|北海|南宁|柳州|桂林|梧州|钦州|来宾|河池|百色|贺州|崇左|防城港|安徽芜湖|合肥|六安|宿州|阜阳|安庆|马鞍山|蚌埠|淮北|淮南|宣城|黄山|铜陵|亳州|池州|巢湖|滁州|湖北武汉|宜昌|襄樊|荆州|恩施州|黄冈|孝感|十堰|咸宁|黄石|仙桃|天门|随州|荆门|潜江|鄂州|神农架林|山西太原|大同|运城|长治|晋城|忻州|临汾|吕梁|晋中|阳泉|朔州|辽宁大连|沈阳|丹东|辽阳|葫芦岛|锦州|朝阳|营口|鞍山|抚顺|阜新|盘锦|本溪|铁岭|黑龙江齐齐哈尔|哈尔滨|大庆|佳木斯|双鸭山|牡丹江|鸡西|黑河|绥化|鹤岗|伊春|大兴安岭|七台河|内蒙古赤峰|包头|通辽|呼和浩特|鄂尔多斯|乌海|呼伦贝尔|兴安盟|巴彦淖尔盟|乌兰察布盟|锡林郭勒盟|阿拉善盟|贵州贵阳|黔东南|黔南|遵义|黔西南|毕节|铜仁|安顺|六盘水|甘肃兰州|天水|庆阳|武威|酒泉|张掖|陇南|白银|定西|平凉|嘉峪关|临夏回族自治州|金昌|甘南|吉林吉林|长春|白山|延边州|白城|松原|辽源|通化|四平|宁夏银川|吴忠|中卫|石嘴山|固原" "
公司已合作单位有山西中医学院、福建医科大学附属第二医院、上海市第六人民医院、北京大学医学部、四平中心医院、广州中医药大学、中科院上海生命科学研究院生化与细胞研究所、解放军第306医院、江南大学、西南医院、吉首大学、西南大学化学化工学院、宁波大学、福建医科大学附属第一医院、中南大学、延安大学附属医院、中国科学院上海药物研究所、天津市儿童医院、江苏省中医药研究院、湘雅医学院、第四军医大学预防系劳动与环境教研室、扬州大学、上海交通大学、中国医科大学、浙江省立同德医院、中国人民解放军第150中心医院、苏州大学、四川大学华西医院、云南大学、扬州大学兽医学院、上海交通大学医学院附属第九人民医院、海南医学院、江苏肿瘤医院、上海市闵行区中心医院、大连医科大学附属第一医院、中国科学院广州生物医药与健康研究院、沈阳药科大学、广州市第八人民医院、南京大学、浙江中医药大学、兰州大学、上海中医药大学、中国农业科学院饲料研究所、厦门市妇幼保健院、重庆大学、南京军区总医院、天津市人民医院、北京医学科学肿瘤医院、江苏大学、桂林医学院附属医院、中国科学院化学研究所、、郑州大学第一附属医院、湖北省人民医院、四川大学华西第二医院、广州中医药大学附属第一医院、黑龙江中医药大学附属第一医院、青海红十字医院、广州医学院第一附属医院、北京红十字朝阳医院、中国医科大学附属一院、江西中医学院附属医院、北京中医药大学东直门医院、山西医科大学第一附属医院、上海长海医院、北京阜外医院、北京安贞医院、上海远大心胸医院、哈尔滨医科大学第一临床医学院、广东霍英东心脏中心、中山医科大学中山眼科中心、天津眼科医院、温州医学院附属眼视光医院、北京儿童医院、重庆医科大学附属儿童医院、复旦大学附属儿童医院、南京中医药大学附属第二医院、湖北十堰市太和医院、济南市儿童医院、中南大学湘雅二医院、天津医科大学代谢病医院" "
c1370 wsu-dlcl2淋巴瘤复苏形式细胞株
c1380 ytmlc-90人肺鳞癌复苏形式细胞株
c1397 143b人骨肉瘤复苏形式细胞株
c1422 abc-1人肺癌腺癌复苏形式细胞株
c1429 atdc5小鼠胚胎瘤复苏形式细胞株
c1432 au565人复苏形式细胞株
c1443 bt-483人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1445 c2bbe1人结肠癌复苏形式细胞株
c1448 c32人黑色素瘤复苏形式细胞株
c1455 cama-1人复苏形式细胞株
c1459 ccf-sttg1人脑星形胶质四代细胞瘤
c1462 chago-k-1人肺支气管癌
c1465 cho-s中国仓鼠卵巢悬浮复苏形式细胞株
c1470 cne2人鼻咽癌复苏形式细胞株
c1480 colo-680n人食管鳞状癌复苏形式细胞株
c1482 cor-l23人肺癌复苏形式细胞株
c1490 dbtrg-05mg人脑胶质母四代细胞瘤
c1492 detroit562人咽头癌胸水转移复苏形式细胞株
c1500 du4475人乳腺上皮复苏形式细胞株
c1518 g-402人肾平滑肌瘤复苏形式细胞株
c1528 gp2d人结肠癌复苏形式细胞株
c1536 hcc1143人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1537 hcc1187人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1538 hcc1395人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1539 hcc1419人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1540 hcc1500人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1541 hcc1569人复苏形式细胞株
c1542 hcc1599人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1543 hcc1806人乳腺鳞状四代细胞癌
c1544 hcc1954人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1545 hcc202人乳腺原发性导管癌复苏形式细胞株
c1549 hcc4006人肺癌腺癌复苏形式细胞株
c1550 hcc70人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1551 hcc-95人肺鳞状四代细胞癌
c1567 hep3b2.1-7人肝癌复苏形式细胞株
c1617 ht55人结肠癌复苏形式细胞株
c1622 huh-1人肝癌复苏形式细胞株
c1636 jhh-7人肝癌复苏形式细胞株
c1647 kns-62人肺支气管鳞状四代细胞癌
c1648 kns-81人神经胶质瘤复苏形式细胞株
c1650 kp-4人胰腺导管四代细胞癌
c1653 kp-n-yn人平滑肌复苏形式细胞株
c1655 kuramochi人卵巢癌复苏形式细胞株
c1667 lk-2人肺癌复苏形式细胞株
c1671 ls1034人结直肠癌复苏形式细胞株
c1673 ls411n人盲肠癌复苏形式细胞株
c1675 ltpa小鼠胰腺癌复苏形式细胞株
c1678 m059k人脑神经胶质瘤复苏形式细胞株
c1680 malme-3m人恶性黑色素瘤复苏形式细胞株
c1693 mda-mb-134-vi人乳腺导管癌复苏形式细胞株
c1727 nci-h1155人非小四代细胞肺癌复苏形式细胞株
c1729 nci-h1355人非小四代细胞肺癌复苏形式细胞株
c1730 nci-h1373人肺癌腺癌复苏形式细胞株
c1731 nci-h1435人非小四代细胞肺癌复苏形式细胞株"
上海卓奥生命科技有限公司
18301908279
其他国家 广州南沙区
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实验细胞培养基常见问题总结：
培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是最基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。别小看细胞培养，这里可蕴含着大大的学问。有时候细胞状态不好，接下来的一系列实验根本就没法做。影响细胞培养的因素很多，那就先从培养基开始说起。
培养基常见问题：
1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？atcc、dsmz、ecacc、riken、promocell、sciencell、ecacc、jcrb、kclb、asterand、iclc以及少数国内外著名大学细胞库收集了绝大多数细胞的详细资料。细胞数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关文献等资料。
2.液体培养基可以放-20℃保存吗？不可以！因为在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致培养基渗透压降低，培养细胞时，细胞容易破裂而死亡。
3.自己新配制的液体培养基能保存多久？我们建议将新配制的培养基放置于4℃，避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。
4.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
5.培养基中是否须添加抗生素？除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。为防止细菌、真菌污染，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100u/ml，链霉素为100ug/ml。
6.为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且ph值越来越偏碱性？培养基保存于4℃冰箱中， 培养基内之co2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之co2，以调整ph值。
7.培养液ph是怎样影响细胞生长的？由于大多数细胞适宜ph值为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对ph值要求也不完全相同，原代细胞培养一般对ph值变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此，配制培养用液时可把液体的ph值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时，ph值会向上浮动0.2左右。
8.培养液渗透压是怎样影响细胞生长的？当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情况下，水分通过渗透流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩，这种情况会使dna和蛋白遭到破坏，细胞周期停滞以及最终使细胞死亡；反之，低渗透压使水分流入细胞内，使细胞肿胀破裂。
9.为什么液体培养基1640有时候颜色发黄，是ph值不对吗？不是。因为配方原因，1640为碱酚红型，其中酚红的浓度只有dmem的四分之一，所以是因为酚红浓度低，而非ph值低。
10.为什么有客户要求培养基中不含酚红？研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。" "
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：
在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！
出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：
1.解冻过程中细胞裂解
推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升。
2.解冻过程中的问题
推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的首选方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养。
3.对冷冻液过敏
推荐的解决方案：a.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。b.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的最佳条件在对数期。
4.被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄
推荐的解决方案：解冻最近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
出现大量细胞碎片的可能原因及推荐解决方案如下：
1.冷冻时细胞密度过低：推荐的解决方案：缩短解冻过程中的时间。将细胞取出后，立即将冻存管浸入在37℃的水浴中，并震荡至全部融化，然后迅速地转移到预热的培养基中。
2.不适当的冷冻过程：推荐的解决方案：解冻不同冷冻室总的试管。确保在冻存过程中采用的适当的技术，并确保使用了适量和适合的冷冻液。
出现生长缓慢的可能原因及推荐解决方案如下：
1.培养瓶的大小：一般解决方案是一些细胞在培养基中倾向于维持一定的密度。将培养物转移到较小的培养瓶中，使细胞密度上升；如，根据培养基的体积，从t75培养瓶转移到2或3个t25培养瓶中。
2.细胞密度过低：通常解决方案是提高未来冷冻物种细胞的冻存密度，或使用较小的培养容器，或解冻多个试管来进行培养。" "
常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、 细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
3、对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。
4、对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时（即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白），此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。
复苏细胞注意事项：
1收到细胞后当天换液，全部更换成客户自己的新鲜培养基，放进培养箱，第二天再消化。
2边观察边消化，根据细胞的形态，终止消化时间，采取以半分钟间隔吹打细胞边缘，如可吹打下来，即终止消化。客户摸索比较好的消化时间。
3随细胞有一份细胞操作说明书，请客户仔细查看。
4记得加1%双抗，降低被污染的概率。另外尽早冻存留种，以备后用。
5售后时间为一周，仅限于细胞本身的质量问题，而因乙方自己不当操作（不规范操作，消化过度，不加双抗导致的污染等）导致的细胞问题不在售后范畴。
6收到细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请您务必重视。
7刚收到细胞时，胎牛血清可以用15%培养两三天，利于细胞尽快恢复状态，细胞状态稳定后，再调回10%即可。
（其中1,2条针对于贴壁细胞，悬浮细胞详情请见细胞操作说明书）" "
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