提取DNA的方法总结与比较

提取dna的方法总结与比较
dna提取是一项经常要做的实验，下面我们就总结了四种dna提取方法并做详细说明和比较。
一.浓盐法提取dna：
a. 利用rna和dna在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1m 氯纳提取化钠抽提,得到的dnp粘液与含有少量辛醇的三氯甲烷一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及三氯甲烷相中间，而dna位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将dna 钠盐沉淀出来.
b. 也可用0.15 mnacl液反复洗涤细胞破碎液除去rnp,再以1mnacl提取脱氧核糖蛋白,再按三氯甲烷---异醇法除去蛋白.
温馨提示：两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
c.以稀盐酸溶液提取dna 时,加入适量去污剂,如sds可有助于蛋白质与dna 的分离。在提取过程中为抑制组织中的dnase对dna 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15mnacl,0.015m柠檬钠,并称ssc溶液,提取dna.
二.阴离子去污剂法提取dna：
用sds或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取dna .由于细胞中dna与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取dna
三. 苯酚抽提法提取dna：
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了dnase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与dna 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而dna溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含dna 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀dna 。此时dna是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的dna保持天然状态
四. 水抽提法提取dna:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去rna，然后将沉淀溶于水中，使dna充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6m.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得dna样品.此法提取的dna中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入sds.
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