类别详细项目配方组成药方的各种药物名称及配比有效成分植物有效成分:黄酮类、挥发油类、甾体及苷类、生物碱类、糖类等。 动物药有效成分:胆汁酸、牛磺酸、麝香酮、麝香醇等。矿物质及重金属人体必须矿物质:钠(na)、钾(k)、钙(ca)、镁(mg)、铁(fe)、锌(zn)、磷(p)等; 有害重金属分析:砷(as)、铅(pb)、镉(cd)、汞(hg)、铜(cu)等。常规理化水分、灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物含量、杂质和亚硫酸盐残留量等。真菌毒素黄曲霉毒素(aflatoxin b1、b2、g1、g2)、赭曲霉毒素及霉菌毒素等。农药残留有机氯农药残留、有机磷农药残留、拟除虫菊酯类农药残留等。兽药残留磺胺类药物、沙星类、四环素类、硝基呋喃类等。微生物检测菌落总数、霉菌及酵母菌、大肠菌群、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、金葡、白念等。其他微生物限度检测、无菌试验、抑菌效果检测、中药指纹图谱等。
· 中药分析检测方法
一、实验目的
使用飞行时间高分辨质谱搜索补药药物中中西药成分,分析补药药物中西药组成成分。
二、供试品制备方法
取“样品”中药液体于2ml离心管中,放入高速离心机中13000r/min离心10min,过0.22um微孔滤膜后装入1.5ml自动进样瓶内,得到补药提取物样品。同样条件得到空白对照样品。将样品放入4℃冰箱保存,在分析前取出(保存时间不能超过24h)。
三、色谱条件
色谱仪器为:岛津lc-30a。色谱柱为unitary c18(2.8μm,2.1mm*150mm);柱温为30℃;流速为0.3ml/min;进样量为2μl;流动相采用乙腈-0.1%甲酸水溶液的梯度洗脱程序,具体见表1。
表1 流动相梯度洗脱程序
time(min)a(0.1%甲酸水)b(乙腈)0.0195515604027510031510031.595535stop
四、色谱条件
质谱仪器为ab sciex triple tof 5600+。
离子化模式为电喷雾正离子模式,离子源电压分别为 5500v,离子源温度为500℃,去簇电压(dp)分别为 100 v,碰撞能量(ce)分别为 35 ev,碰撞能量扩展(ces)分别为15ev。雾化气体为氮气,辅助气 1 为 50 ps i,辅助气 2 为 50 psi,气帘气为 40 psi。一级质谱母离子扫描范围为 50~1000,ida 设置响应值超过100 cps的6个最高峰进行二级质谱扫描,子离子扫描范围为50~1000,开启动态背景扣除(dbs)。
离子化模式为电喷雾负离子模式,离子源电压分别为-4500v,离子源温度为500℃,去簇电压(dp)分别为 100 v,碰撞能量(ce)分别为 -35 ev,碰撞能量扩展(ces)分别为15ev。雾化气体为氮气,辅助气 1 为 50 ps i,辅助气 2 为 50 psi,气帘气为40 psi。一级质谱母离子扫描范围为50~1000,ida 设置响应值超过100 cps的6个最高峰进行二级质谱扫描,子离子扫描范围为50~1000,开启动态背景扣除(dbs)。
五、实验结果
图一:“样品”中药提取物正离子模式下与空白对照总离子流图
图二:“样品” 中药提取物负离子模式下与空白对照总离子流图
本实验查找了人参、灵芝、党参、三七、甘草、山药、熟地、白芍、枸杞、当归、麝香、黄芪、白术、冰片、陈皮、黄连、葛根、共17种中药、维生素、氨基酸及西药成分,建立起412种成分数据库,采用飞行时间高分辨质谱对“样品”中药提取物定性检测,得出结果如下:
5.1 样品中药活性成分分析
5.1.1通过无目标物搜索,从质谱图中找到响应值超过500的成分共6578种;
5.1.2通过数据库中药活性成分目标物搜索:
(1)中药活性成分检测
补药中药正、负离子模式下共检测到113种活性成分,其中质谱响应强度大于10000的活性成分共有32种,按质谱响应强度排序分别为:葛根素、樱黄素、芫花素、毛蕊异黄酮、鹰嘴豆芽素a、芒柄花苷、桉叶醇、茅术醇、β-榄香醇、毛蕊花糖苷、6-o-e麦角甾苷、白术内酯、(+)-丹芝酸 d、京尼平苷酸、没食子酸乙酯、8-表-马钱子苷酸、灵芝醛 b、齐墩果酮酸、尿嘧啶核苷、白术三醇、甘草苷、甜菜碱、柠檬酸单甲脂、2-甲氨基苯酸甲酯、芒柄花素、异鼠李素、5-羟基-6,7,8,3,4-五甲氧基黄酮、7-羟基-3,5,6,3,4-五甲氧基黄酮、5-去甲川陈皮素、刺囊酸、阔叶合欢萜酸、灵芝酸 l
(2)中药粉末组方分析
将中药中检测到的中药活性成分归类,统计检测的中药活性成分在数据库中的占比,从而判断补药中药组方。
种类中药检测总数(种)数据库(种)总检测成分占比人参0250.00%************党参4429.52%三七41625.00%甘草113333.33%山药31618.75%************白芍81172.73%枸杞41136.36%************麝香2825.00%黄芪51533.33%*********54.55%冰片5955.56%***1530***黄连41233.33%葛根61250.00%通过图表数据分析总检测成分在数据库中占比发现:
1、灵芝、白芍这2种中药检测到的活性成分在数据库中的占比超过60%,“样品”中药组方中含有这2种中药的可能性较大。
2、白术、冰片、陈皮、葛根4种中药检测到的活性成分在数据库中的占比也超过50%,“样品”中药组方中可能含有这4种中药;
3、其他中药检测到的活性成分在数据库中的占比不高,数量较少,所以含有这些中药的可能性较小。
5.2 “样品”氨基酸及维生素营养成分定性鉴定
通过文献查找,建立常见维生素及氨基酸数据库,通过对“样品”补药中维生素及氨基酸成分分析,共发现以下营养成分:
维生素b2、维生素b4、维生素c、苏氨酸、谷氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸。
nameformulaadductfound masserrorrtinstensity维生素维生素b2c17h20n4o6+h377.14570.47.128324维生素b4c5h5n5-h134.047643.21.22147102维生素cc6h8o6-h175.0255141.994186苏氨酸c4h9no3+h120.06501-4.31.65723谷氨酸c5h9no4+h148.06038-0.41.98891氨基酸缬氨酸c5h11no2+h118.086441.61.2720460异亮氨酸c6h13no2+h132.102020.92.191475亮氨酸c14h19no4+h266.138750.33.6249116苯丙氨酸c10h13no2+h180.10166-1.42.414482组氨酸c6h9n3o2+h156.0766-11.061250赖氨酸c6h14n2o2+h147.1123-3.41.052375精氨酸c6h14n4o2+h175.11835-3.51.235521脯氨酸c5h9no2+h116.071013.51.0531968
5.3“样品”西药及抗生素成分分析
通过文献查找,市场上常用的男性保健西药有达泊西汀、阿伐那非、他达拉非、伐地那非瓜氨酸、枸橼酸西地那非、西地那非、氨甲丙二脂、地西泮、氟西泮、氯氮卓、奥沙西泮、三唑仑、孕酮、睾酮、甲睾酮、丙酸睾酮、dht、苯丙酸诺德龙、癸酸诺龙、甲烯龙、康力龙、去氢甲睾酮、双氢睾酮、雌二醇、雄烯二酮、去氢表雄酮、雌醇黄体激素、黄体生成激素、皮质醇、甲状腺素32种西药,通过飞行时间质谱对32种西药、31种抗生素的分子式及分子量进行比对,从“样品”中检测到如下西药成分:
1名称:西地那非
质谱图:
欢迎来电咨询:18129948793(微信同号)张先生
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