酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术原理

 
酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术
酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术的原理 由于醋酸纤维膜是由醋酸纤维素组成的，对蛋白质分子的移动几乎无阻力，差不多所有在电场中能泳动的物质均能在醋酸纤维膜里自由移动，因此在免疫电泳中，醋酸纤维膜是一优良的载体。将酶标记抗体与相应抗原在醋酸纤维膜进行电泳，生成免疫复合物，用酶底物显色，能大幅度地提高检测的灵敏度和可靠性。使用酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术（enzyme-linked-cellulosa-acetate-membrane-immunoelectropheresis,简称elcaie），笔者文章公布的检出量是0.3ng的rmv，其实当时的实验结果已经显示0.1ng的rmv检测量。
酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术的程序（检测rmv）1,器材与设备
（1）电泳仪（包括电泳槽）；
（2）醋酸纤维膜（10cm×14cm,厚度10dmm；
（3）微量进样器；
（4）竹钳。
2，材料与试剂
以0.2mol/lph7.2硼酸缓冲液连续稀释的rmv溶液（10ng/ml→1×10⒌ng/ml）；hrp标记的rmv免疫的兔igg(戊二醛一步法交联)；洗涤液，每1000ml中有500ml 0.1mol ph8.2巴比妥缓冲液和85g食盐，其余为蒸馏水；底物与供氢体溶液（h2o2和dab－4hc1）；0.1mol/l ph8.6巴比妥那钠盐酸缓冲液。 3，实验程序
将醋酸纤维膜用软铅笔轻轻划好点样线，酶标抗体样点距膜边3cm,抗原样点与酶标抗体样点对距3cm,两个样点横距1.5cm.将上述薄膜浸入0.1mol/l ph8.6巴比妥那钠盐酸缓冲液中浸湿，取出薄膜，用滤纸吸去表面水分，但不要干燥。用微量进样器点样，抗体每样点用酶标抗体液10ul,抗原样点第一点是对照，滴加10ul健青菜蛋白溶液；第二、三、四、五样点滴加rmv抗原溶液各10ul,浓度分别为1×10⒌ng/ml、1×10⒋ng/ml、1×10⒊ng/ml、100ng/ml；第六、七样点分别滴加5ul、3ul、，浓度为100ng/ml；第八样点滴加10ul,浓度为10ng/ml；第九样点滴加5ul,浓度为10ng/ml.点样完毕，将薄膜置于电泳槽中央棱边，使其架空，然后用滤纸作盐桥，电泳缓冲液为0.1mol/l ph8.6巴比妥那钠盐酸缓冲液，抗原端接负极。待作为盐桥的滤纸全部湿润后，接通电源，控制电压150v，电泳时间1.5h左右。电泳完毕，将薄膜浸洗在洗涤中过一夜。次日将薄膜在清水中漂洗3－5min后取出。最后滴加h2o2（0.3%）和dab－4hc1溶液，各占一半量，几分钟内就会显示结果。声明：巴比妥那钠，文字中含违禁字请无视‘那’字糖原含量试剂盒说明书
线粒体复合体ⅳ试剂盒说明书
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