近日,有客户就样品的搜集以及保存的问题来电,期望我司能给出主张,正确的搜集和保存也是保证实验成功的重要根底。
操作过程:
1)运用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生很多的泡沫,以免加样时参加很多的气泡,产生加样上的误差。
2)依据待测样品数量加上规范品的数量决议所需的板条数。每个规范品和空白孔主张做复孔。每个样品依据自己的数量来定,能运用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后参加50ul于反响孔内。
3)参加稀释好后的规范品50ul于反响孔、参加待测样品50ul于反响孔内。当即参加50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,悄悄振动混匀,37℃温育1小时。
4)甩去孔内液体,每孔加满洗刷液,振动30秒,甩去洗刷液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷,洗刷次数添加一次。
5)每孔参加80ul的亲和链酶素-hrp,悄悄振动混匀,37℃温育30分钟。
6)甩去孔内液体,每孔加满洗刷液,振动30秒,甩去洗刷液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷,洗刷次数添加一次。
7)每孔参加底物a、b各50ul,悄悄振动混匀,37℃温育10分钟。防止光照。
8)取出酶标板,敏捷参加50ul停止液,参加停止液后应当即测定结果。
9)在450nm波利益测定各孔的od值。
样品的搜集和保存
1)血清-----操作过程中防止任何细胞刺激。运用不含热原和内毒素的试管。搜集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞敏捷小心地分离。
2)血浆-----edta、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆-----将组织参加适量shengli盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存------假如样品不当即运用,应将其分成小部分-70 ℃保存,防止重复冷冻。尽可能的不要运用溶血或高血脂血。假如血清中很多颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热冻结。进口elisa试剂盒应在室温下冻结并确保样品均匀地充分冻结。
研域(上海)化学试剂有限公司
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